Como fazer OGM's - PCR

Polymerase Chain Reaction – PCR

Consiste na criação de várias cópias de uma molécula ou porção de ADN sem ser necessário recorrer a bactérias ou outros organismos vivos e em poucas horas. Recorre-se a este método porque para fazer o que quer que seja que meta ADN, precisamos de várias porções deste. Mas se só precisarmos de uma porção de ADN, chamemos-lhe região de interesse, então só multiplicamos essa região.




• Separam-se as duas cadeias de ADN ao quebrar as ligações de hidrogénio, expondo-o a uma temperatura que ronda os 95oC;
• Diminui-se a temperatura, para que os iniciadores (pequenos fragmentos de ADN) se emparelhem às cadeias simples de ADN;
• Volta-se a aumentar a temperatura para aproximadamente 70oC para que a ADN polimerase adicionada à reacção seja activada;
• A ADN polimerase sintetiza uma nova cadeia de ADN por complementaridade;
• Elongação das cadeias (devido à acção da ADN polimerase) entre os iniciadores.
• Obtêm-se duas cadeias iguais à inicial, com amplificação da região de interesse.

Iniciadores: Pequenos fragmentos de ADN, sendo os usados em laboratório sintetizados pelos cientistas, que definem o fragmento de ADN que será copiado. Pois é nos iniciadores que o ADN vai começar a ser copiado. Por isso é que são criados em laboratório, para que se possa definir a região de interesse.

ADN polimerase: Enzima que reconhece e liga-se aos iniciadores, dando início à formação da segunda cadeia (por complementaridade, ligando-se a guanina (G) à citosina (C) e a adenina (A) à timina (T) ).

Como para que este processo aconteça em laboratório tem de se submeter o ADN e as enzimas a temperaturas elevadas, as enzimas utilizadas pertencem a bactérias termófilas (bactérias que habitam em fontes termais), visto serem capazes de aguentar, juntamente com as suas enzimas, estas temperaturas tão elevadas. Se fossem utilizadas enzimas humanas por exemplo, estas tornar-se-iam inutilizáveis pois só resistem a temperaturas até aos 41oC.
A enzima mais utilizada é a Taq polimerase, que provém da bactéria Thermus aquaticus.